女人天天干夜夜爽视频 大肠杆菌转化实验

【资料简介】

大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。
实验材料    大肠杆菌
试剂、试剂盒    CaCl2氨苄*LB
仪器、耗材    离心机分光光度计摇床
实验步骤
1.  接种—个单菌落于50 ml LB培养液中，于37℃摇床培养（250 r/min）。

2.  往一个2 L 的烧瓶中加入400 ml LB培养液，再加入4  ml 培养液，于37℃；摇床，培养至OD590为0.375。

3.  将培养液分装到8个50 ml 预冷无菌的聚丙烯管中，于冰上放置5~10 min，然后于4℃，1 600 g 离心7 min。

4.  细胞沉淀用10 ml 冰冷的CaCl2“溶液重悬，于4℃，以1 100 g 离心5 min 。

5.  细胞沉淀用10 ml 冰冷的CaCl2溶液重悬，冰上放置30 min，于4℃，1 100 g 离心5 min。

6.  用2 ml  冰冷的CaCl2溶液重悬各管细胞，然后按每管250 μl 的量分装于预冷的无菌聚丙烯管中，立即冻存于- 70℃。

7.  按照以下各步骤用10 ng pBR322转化100 μl 感受态细菌。

8.  将合适体积的转化物涂于含有氨苄*的LB平板上，37℃培养。

9.  将10 ng 加入到一个15 ml 无菌的圆底试管中，并放置冰上。

10.  将盛有感受态细胞菌的管子握在手上使菌液迅速熔化。

11.  立即将100 μl 感受态细菌加 入到管中，轻轻旋动，并放置冰上10 min 。

12.  将管故入42℃水浴2 min 进行热休克，然后加入1 ml LB 培养液于每一支试管中。

13.  于37℃置滚筒式摇床口培养1 h。

14.  将几个稀释度菌液涂布于含合适抗生素的平板上，于37℃培养12~16 h。