女人天天干夜夜爽视频 大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶（pERK） 试剂盒

【资料简介】

大鼠 磷酸化细胞外信号调节激酶 (pERK) 酶联免疫检测

试剂盒使用说明书

使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于*双抗体夹心技术原理，来检测大鼠 磷酸化细胞外信号调节激酶 (pERK)) ，只能用 于研究用途，不得用于医学诊断。

用    途： 用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中 磷酸化细胞外信号调节激酶 (pERK) 的测定。

工作原理

本试剂盒采用的是*双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中大鼠 磷酸化细胞外信号调节激酶 (pERK) 的水平。向预先包被了大鼠 磷酸化细胞外信号调节激酶 (pERK) 单 克隆抗体的酶标孔中加入 磷酸化细胞外信号调节激酶 (pERK) ，温育；温育后，加入*标记的抗 pERK 抗体，再与链霉亲和素 -HRP 结合，形成免疫复合物， 再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物 A 、 B ，产生蓝色， 并在酸的作用下转化成zui终的黄色。 颜色的深浅与样品中大鼠 磷酸化细胞外信号调节激酶 (pERK) 的浓度 呈正相关。

试剂盒组成

1	标准品（ 3200 pg/ml ）	0.5ml	7	显色剂A液	3ml
2	标准品稀释液	3ml	8	显色剂B液	3ml
3	酶标包被板	12孔×4条	9	终止液	3ml
4	链霉亲和素 -HRP	3ml	10	说明书	1份
5	20 倍浓缩洗涤液	20ml	11	封板膜	2张
6	*标记的抗 - pERK 抗体	1ml	12	密封袋	1个

需要而未提供的试剂和器材

1. 37℃ 恒温箱。
2. 标准规格酶标仪。
3. 精密移液器及一次性吸头
4. 蒸馏水，
5. 一次性试管
6. 吸水纸

注意事项

1. 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。 酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
3. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
4. 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和 封板膜 。
5. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
6. 底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

标本要求

1 ． 不能检测含NaN3的样品 ，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2． 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃ 保存，但 应避免反复冻融

操作程序

1. 标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：

1600pg/ml	（ 5 号标准品）	120μl 的原倍标准品加入 120μl 的标准品稀释液
800 pg/ml	（ 4 号标准品）	120μl 的 5 号标准品加入 120μl 的标准品稀释液
400 pg/ml	（ 3 号标准品）	120μl 的 4 号标准品加入 120μl 的标准品稀释液
200 pg/ml	（ 2 号标准品）	120μl 的 3 号标准品加入 120μl 的标准品稀释液
100 pg/ml	（ 1 号标准品）	120μl 的 2 号标准品加入 120μl 的标准品稀释液

1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
2. 加样： 1 ）空白孔： 空白对照孔不加样品，*标记的抗 pERK 抗体，链霉亲和素 -HRP ，只加显色剂 A&B 和终止液， 其余各步操作相同； 2 ）标准品孔：加入 标准品 50μl ， * -HRP50μl （标准品中已事先整合好*抗体，故不加） ； 3) 待测样品孔 : 加入 样本 40μl ，然后各加入 抗 - pERK 抗体 10μl 、 链酶亲和素 -HRP50μl ，盖上封板膜，轻轻振荡混匀， 37 ℃ 温育 60 分钟。
3. 配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。
4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
5. 显色：每孔先加入显色剂 A 50μl ，再加入显色剂 B 50μl ，轻轻震荡混匀， 37 ℃ 避光显色10分钟。
6. 终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
7. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后 10 分钟以内进行。

9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。