牛牛天天人人综合影院 人白细胞介素-8（IL-8）酶联免疫试剂盒

【资料简介】

人 白细胞介素 -8(IL-8) 酶联免疫试剂盒 使用说明

本试剂盒适用于以下样本的测试（黑底字体为适用样本）：

血清、血浆 - 组织匀浆 – 腹水 – 细胞培养上清

本试剂盒仅供研究，不用于临床诊断

目录

1. 实验原理
2. 试剂盒组成
3. 试剂盒保存
4. 需要而未提供的试剂和器材
5. 样本前处理
6. 洗板方法
7. 详细操作程序
8. 操作总结
9. 性能参数

1. 实验原理： 本试剂盒采用的是*双抗体夹心酶联免疫吸附法（ ELISA ）测定样品中人白细胞介素 -8(IL-8) 的水平。向预先包被了人白细胞介素 -8(IL-8) 单克隆抗体的酶标孔中加入白细胞介素 -8(IL-8) ，温育；温育后，加入*标记的抗 IL-8 抗体，再与链霉亲和素 -HRP 结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物 A 、 B ，产生蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅与样品中人白细胞介素 -8(IL-8) 的浓度呈正相关。

2. 试剂盒组成：

1	标准品（ 400 ng/L ）	0.5ml	7	显色剂 A 液	3ml
2	标准品稀释液	3ml	8	显色剂 B 液	3ml
3	酶标包被板	12 孔× 4 条	9	终止液	3ml
4	链霉亲和素 -HRP	3ml	10	说明书	1 份
5	20 倍浓缩洗涤液	20ml	11	封板膜	2 张
6	*标记的抗 - IL-8 抗体	1ml	12	密封袋	1 个

3. 试剂盒保存

• 2-8 ℃下保存 6 个月，在 -20 ℃下可以保存更长的时间。酶标板为真空包装，板条可以拆卸，拆开以后如一次不能用完，请放入提供的密封袋中，放入干燥剂， 2-8 ℃保存，在一个月之内仍然有效。试剂不能反复冻融。

4 ． 需要而未提供的试剂和器材

1. 37℃ 恒温箱。
2. 标准规格酶标仪。
3. 精密移液器及一次性吸头
4. 双蒸水或超纯水
5. 干净的试管或Eppendof管
6. 吸水纸

5 样本前处理

1. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
   b.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
   c.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
   d.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
   e.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
   f.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
2. 洗板方法

1. 手工洗板：先洗去酶标孔中的的液体，在吸水纸上拍干，然后每孔加入 300 μl 稀释好的洗涤液，轻轻摇晃 30 秒，然后甩掉，在吸水纸上拍干，重复 4-5 次。
2. 洗板机洗板：洗板机洗板比较便捷，但应操作熟练后使用。
3. 详细操作程序

1. 使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
2. 标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：

200 ng/L	（ 5 号标准品）	120μl 的原倍标准品加入 120μl 的标准品稀释液
100 ng/L	（ 4 号标准品）	120μl 的 5 号标准品加入 120μl 的标准品稀释液
50ng/L	（ 3 号标准品）	120μl 的 4 号标准品加入 120μl 的标准品稀释液
25 ng/L	（ 2 号标准品）	120μl 的 3 号标准品加入 120μl 的标准品稀释液
12.5 ng/L	（ 1 号标准品）	120μl 的 2 号标准品加入 120μl 的标准品稀释液

1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
2. 加样： 1 ）空白孔： 空白对照孔不加样品，*标记的抗 IL-8 抗体，链霉亲和素 -HRP ，只加显色剂 A&B 和终止液， 其余各步操作相同； 2 ）标准品孔：加入 标准品 50μl ， * -HRP50μl （标准品中已事先整合好*抗体，故不加） ； 3) 待测样品孔 : 加入 样本 40μl ，然后各加入 抗 - IL-8 抗体 10μl 、 链酶亲和素 -HRP50μl ，盖上封板膜，轻轻振荡混匀， 37 ℃ 温育 60 分钟。
3. 配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。
4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
5. 显色：每孔先加入显色剂 A 50μl ，再加入显色剂 B 50μl ，轻轻震荡混匀， 37 ℃ 避光显色10分钟。
6. 终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
7. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止液后 10 分钟以内进行。

9. 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。

1. 操作总结

准备试剂，样品和标准品

加入准备好的样品和标准品，*标记二抗和酶标试剂，37℃反应60分钟

洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色10分钟

加入终止液

10 分钟之内读OD值

计算

1. 性能参数

1. 批内差： CV ＜ 10%
2. 批间差： CV ＜ 12%
3. 检测范围 ： 1 ng/L →380 ng/L