男女呻吟久久免费视频 1,25二羟基维生素D3怎样检测

【资料简介】

人 1 ,25 二 羟基维生素 D3 （ 1 ,2 5 -(OH)2D3 ） 酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96 T

6 ng/L -180ng/L

使用目的：

本 试 剂 盒 用 于 测 定 人 血 清 、 血 浆 及 相 关 液 体 样 本 中 1,25 二 羟 基 维 生 素 D 3

（ 1,25-(OH)2D3 ） 含量。 实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人 1,25 二羟 基维生素 D 3 （ 1 ,25-(OH)2D3 ） 水平。 用纯化的人 1,25 二 羟基维生素 D 3 （ 1,25-(OH)2D3 ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包 被单抗的微孔中依次加入 1,25 二 羟基维生素 D 3 （ 1,25-(OH)2D3 ） ， 再 与 H R P 标 记的 1,25 二 羟基维生素 D 3 （ 1,25-(OH)2D3 ）抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物，经过*洗 涤后加底物 T M B 显色。 T M B 在 H R P 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终 的黄色。颜色的深浅和样品中的 1,25 二 羟基维生素 D 3 （ 1,25-(OH)2D3 ） 呈正相关。用酶标 仪在 450nm 波长下测定吸光度（ O D 值），通过标准曲线计算样品中人 1,25 二 羟基维生素 D 3 （ 1,25-(OH)2D3 ） 浓度。

试剂盒组成

1	30 倍 浓缩洗涤液	20ml × 1 瓶	7	终止液	6ml × 1 瓶
2	酶标试剂	6ml × 1 瓶	8	标准品（ 320 ng/L ）	0.5ml × 1 瓶
3	酶标包被板	12 孔 × 8 条	9	标准品稀释液	1.5ml × 1 瓶
4	样品稀释液	6ml × 1 瓶	10	说明书	1 份
5	显色剂 A 液	6ml × 1 瓶	1 1	封板膜	2 张
6	显色剂 B 液	6ml × 1/ 瓶	12	密封袋	1 个

标本要求

1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于 - 20 ℃保存，但应避免反复冻融

2 ．不能检测含 NaN3 的样品，因 N aN3 抑 制辣根过氧化物酶的（ H R P ） 活性。 操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。

160 ng/L	5 号标准品	150μl 的 原倍标准品加入 1 50μl 标准品稀释液
80 ng/L	4 号标准品	150μl 的 5 号 标准品加入 1 50μl 标准品稀释液
40 ng/L	3 号标准品	150μl 的 4 号 标准品加入 1 50μl 标准品稀释液
20 ng/L	2 号标准品	150μl 的 3 号 标准品加入 1 50μl 标准品稀释液
10 ng/L	1 号标准品	150μl 的 2 号 标准品加入 1 50μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl ， 待 测样品孔中先加样品稀释液 40μl ， 然后再加待测样品 1 0μl （ 样品zui终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃温育 3 0 分 钟。

4. 配液：将 3 0 倍 浓缩洗涤液用蒸馏水 3 0 倍 稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒 后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3 。

8. 洗涤：操作同 5 。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50μl ，再加入显色剂 B 50μl ，轻轻震荡混匀， 37 ℃ 避光显色

15 分 钟 .

10. 终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ O D 值 ） 。 测定应在加终止 液后 1 5 分 钟以内进行。

操作程序总结：

计算

以标准物的浓度为横坐 标 ， O D 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲 线 ，根据样 品 的 O D 值 由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 O D 值 计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 O D 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。

注意事项

1 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分 钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。

2 ．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分 钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4 ． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 O D 值 大于标准品孔*孔的 O D 值 ） ， 请 先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计 算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6 ．底物请避光保存。

7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9 ．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如 与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期

1 ．试剂盒保存：； 2-8 ℃。

2 ．有效期： 6 个月