女人天天干夜夜爽视频 食物总抗氧化能力（TAC）比色法（DPPH）定量检测试剂盒

【资料简介】

主要用途

食物总抗氧化能力（TAC）比色法 ( DPPH ) 定量检测试剂是一种旨在通过有机氮自由基染料 DPPH 的参与，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚 Trolox的总抗氧化能力，即消除自由基等值浓度的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种新鲜组织（动物、人体、昆虫等）的总抗氧化能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2 - ）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H 2 O 2 ）、羟自由基或氢氧基

（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO - ）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO - ）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）

次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等

细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如

冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物

歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、

铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素

（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。通过稳定的有机氮自由基染料 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-Dipheny1-2-picrylhydrazylradical；DPPH），受到抗氧化剂的去自由基作用，呈现深紫色转化为黄色的变化，衡量体系中抗氧化剂捕获自由基、消耗抗氧化剂的能力，在分光光度仪(515nm波长） 的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与标准化抗氧化剂水溶性生育酚Trolox对照。

保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效保证 6 月

用户自备

5 0 毫升烧杯：用于样品操作的容器

15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5 毫升离心管：用于标准样品配制的容器

4℃台式离心机：用于样品操作

96 孔板：用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

样品准备

1、固态食品处理

1． 秤取 1 克固态食品或粉末到 50 毫升烧杯，杯口封口膜密封

2． 加入 8  毫升 清理液（Reagent A）

3． 搅拌 30 分钟，充分混匀

4． 继续加入 清理液（Reagent A） 到终容量为 10 毫升

5． 过滤纸过滤，去除不溶性固体颗粒

6． 封口膜封口备用

2、液态食品处理

1． 移取 5 毫升待测液态食品到 15 毫升锥形离心管

2． 放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g

3． 移取上清液到新的 15 毫升锥形离心管

4． （选择步骤）可以加入适量的 清理液（Reagent A）

5． （选择步骤）过滤纸过滤（如果离心处理，样品仍然不清澈）

6． 置于冰槽里备用或放进-20 冰箱里保存

• 标准液准备

1． 准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管

2． 移取 50  微升 标准液（Reagent D ） 到 1 号管

3． 小心移取 10  微升 缓冲液（Reagent B） 和 40  微升标准液 （Reagent D ） 到 2 号管，混匀

4． 小心移取 20  微升 缓冲液（Reagent B） 和 30  微升标准液 （Reagent D ） 到 3 号管，混匀

5． 小心移取 30  微升 缓冲液（Reagent B） 和 20  微升标准液 （Reagent D ） 到 4 号管，混匀

6． 小心移取 50  微升 缓冲液（Reagent B） 到 5 号管

7． 将 1 至 5 号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	缓冲液（Reagent B）	标准液（Reagent D ）	测定体系 标准 Trolox 浓度
1	0微升	50微升	300微摩尔/升
2	10 微升	40 微升	240 微摩尔/升
3	20 微升	30 微升	180 微摩尔/升
4	30 微升	20 微升	120 微摩尔/升
5	50 微升	0 微升	0

三、样品测读

实验开始前，将－20 冰箱里的试剂置于室温下融化，实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化，

移取 5  毫升染色液 B（Reagent C2） 到 1  瓶染色液 A（Reagent C1） 里，混匀，置于暗室里，标记为 染色工作液 ，避免光照。然后进行下列操作。

1． 准备 1 个 96 孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔

2． 分别移取 205  微升 缓冲液（Reagent B） 到 96 孔板里的每个孔里

3． 分别加入 25  微升 染色工作液

4 ． 加入 20  微升 缓冲液（Reagent B） 到空白对照孔

5 ． 加入 20  微升上述配制的 标准液（Reagent D ） 到相应标准对照孔里

6 ． 加入 20  微升组织裂解样品（100 微克食品总量）到样品孔里

7 ． 轻轻摇动 96 孔板，使其混匀

8 ． 室温下孵育 1 5  分钟

9 ． 即刻放进酶标仪里测读： 515 nm 波长

10 ． 分析结果：

1） 构建标准曲线：纵座标（Y 轴）为吸光单位（OD 730 nm ）；横座标（X 轴）为标准 Trolox 浓

度（微摩尔/升）

2） 空白对照孔为zui大吸光单位（OD 515 nm）读数

3） 标准对照孔和样品孔为实际吸光单位（OD 515 nm）读数

4） 根据标准曲线获得样品对应 Trolox 浓度（微摩尔/升）

5） 计算样品实际总抗氧化能力

【根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（微摩尔/升）×0.25(体系容量；毫升）×样品稀释倍数】÷0.02

(样品容量；毫升）=（微摩尔/升TROLOX等值）

6） 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际抑制百分率）

【（空白对照孔吸光单位读数 -实际吸光单位读数）÷空白对照孔吸光单位读数】×100%

7） IC50：50％抑制率所需的样品单位：TROLOX 等值或样品重量（毫克/毫升）或样品容量（微升） ×（所需样品单位）=（已知样品单位÷试剂抑制百分率）×50%