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【资料简介】

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谷胺酰胺合成酶 （ Glutamine synthetase ， GS ） 试剂盒说明书

测定意义

分光光度法 50 管/ 24 样

GS （ EC 6.3.1.2 ） 主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨 酸 合 成谷氨 酰 胺 ， 不 仅 可以防 止 过多的 铵 离子对 生 物有毒 性 ， 而 且 谷氨酰 胺 也 是 氨 的 主要储 存和运输形式。

测定原理

GS 在 ATP 和 Mg 2+ 存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为 γ─ 谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下与铁形成红色的络合物；该络合物在 540nm 处有zui大吸 收峰，可用分光光度计测定。

所需的仪器和用品

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、 1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸 馏水。

试剂的组成和配制

提取液： 30mL×1 瓶， 4 ℃保存。 试剂一： 10mL×1 瓶， -20 ℃保存。 试剂二： 10mL×1 瓶， -20 ℃保存。

试剂 三 ： 粉 剂 × 2 瓶 ， - 2 0 ℃保存 。 用时 每 瓶加入 5 m L 蒸馏水充 分 溶解备 用 ， 用不 完 的试剂仍

- 2 0 ℃保 存 。

试剂四： 10mL×1 瓶， 4 ℃保存。

样本测定的准备

按照 组 织质 量 （ g ） ：提 取 液体积 ( m L ) 为 1 ： 5~10 的比 例 （建 议 称取约 0.1g 组织 ， 加入 1 m L

提 取 液 ） ，进 行 冰浴匀 浆 。 800 0 g 4 ℃离心 10 mi n ， 取 上清， 置 冰上待 测 。

测定步骤

1 、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm ，蒸馏水调零。

2 、 在 EP 管中加入下列试剂：

试剂名称（ μL ）	测定管	对照管
试剂一	320
试剂二		320
试剂三	140	140
样本	140	140

混匀， 37 ℃（哺乳动物）或 25 ℃（其他物种）准确水浴 30min

试剂四

200

200

混 匀 ， 静置 10 m i n 后 ， 5000g ， 常 温 离心 10 m i n ， 取上 清 液测定 540 n m 处 的 吸光值 A 。 △A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需设一个对照管。

GS 活力单位的计算

（ 1 ）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每 min 使 540nm 下吸光值变化 0.01 定义 为一个酶活力单位。

GS （ U/mg prot ）＝ ΔA×V 反总 ÷ （ Cpr×V 样） ÷0.01÷T =19×ΔA÷Cpr

（ 2 ）按样本鲜重计算：

单位 的 定义 ： 每 g 组织 在 每 m L 反应 体 系中每 m i n 使 540 n m 下吸光值变化 0.01 定义 为 一个 酶活力单位。

GS （ U/g 鲜重）＝ ΔA×V 反总 ÷(W× V 样 ÷V 样总 )÷0.01÷T =19×ΔA÷W

V 反总：反应体系总体积， 0.8mL ； V 样：加入样本体积， 0.14mL ； V 样总：加入提取液 体积， 1 mL ； T ：反应时间， 30 min ； Cpr ：样本蛋白质浓度， mg/mL ； W ：样本质量， g 。