牛牛天天人人综合影院 小鼠血清胰岛素含量检测方法

【资料简介】

                               牛牛天天人人综合影院 小鼠血清胰岛素含量检测方法

实验原 理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平 。 用纯化 的 小鼠 胰 岛 素

(Insulin)抗 体 包 被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)， 再 与 HRP 标 记 的 胰 岛 素(Insulin)抗 体 结合，形 成 抗体-抗 原-酶 标抗体复合物，经过*洗涤后 加底物 TMB 显 色 。TMB 在 HRP 酶 的 催 化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄 色。颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈 正 相关 。 用 酶 标 仪在 450nm 波 长 下 测定吸光度

（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)浓度。

试剂盒 组 成

1	30 倍 浓 缩洗涤液	20ml×1 瓶	7	终止液	6ml×1 瓶
2	酶标试剂	6ml×1 瓶	8	标准品（16 mIU/L）	0.5ml×1 瓶
3	酶标包被板	12 孔 ×8 条	9	标准品稀释液	1.5ml×1 瓶
4	样品稀释液	6ml×1 瓶	10	说明书	1 份
5	显色剂 A 液	6ml×1 瓶	11	封板膜	2 张
6	显色剂 B 液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1 个

标本要 求

1． 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2 ．不能检测含Na N 3的 样 品 ，因 NaN3 抑 制 辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步 骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。

8.0 mIU/L	5 号标准品	150μl 的 原 倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
4.0 mIU/L	4 号标准品	150μl 的 5 号 标 准品加入 150μl 标准品稀释液
2.0 mIU/L	3 号标准品	150μl 的 4 号 标 准品加入 150μl 标准品稀释液
1.0 mIU/L	2 号标准品	150μl 的 3 号 标 准品加入 150μl 标准品稀释液
0.5 mIU/L	1 号标准品	150μl 的 2 号 标 准品加入 150μl 标准品稀释液

2. 加 样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待 测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl ， 待 测 样 品孔中先加样品稀释液 40μl ， 然 后再加待测样品 10μl （样品zui终稀释度为 5 倍 ） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃ 温 育30 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍 稀 释后备用

5. 洗 涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒 后 弃去 ，如此 重复 5 次 ， 拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl， 空 白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显 色：每孔先加入显色剂 A50μl， 再 加 入显色剂 B50μl， 轻轻震荡混匀，37℃避 光 显 色 1 0 分 钟 .

10.终止：每孔加终止液 50μl， 终 止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测 定：以空白空调零，450nm 波 长 依 序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

计 算

以 标 准物 的 浓度 为 横坐 标 ，OD 值 为 纵坐 标 ，在 坐 标纸 上 绘出 标 准 曲 线， 根 据样 品 的 OD 值 由 标 准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值 计 算 出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值 代 入 方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。 注意事项

1．试 剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分 钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请 每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值 大于标准品孔*孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。 保存条件及有效期

1． 试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 个月

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