一、试剂
1 、 10 × TBE （ pH 8.3 ）：
2 、 46% 尿素溶液：
3 、 20% 聚丙烯酰胺溶液
4 、 10% 过硫酸胺
5 、引物
6 、模板
7 、 DNA 聚合酶
8 、放射性标记的 dNTP 和 ddNTP 贮存液
9、TEMED
二、操作方法
（一）由双链质粒制备单链DNA膜板
取质粒 DNA （溶于双离蒸去离子水中） 8μl （ 1.5 ～ 2ug ）
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加 2mol NaOH 2ul ，混匀后稍加离心，置室温 10min
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加 3mol 乙酸钠（ pH5.2 ） 3μl
双蒸去离子水 7μl
无水乙醇 60μl
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置液氮 10min ，离心 10min （ 13krpm ），
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加 70%乙醇洗1次，离心 （ 13krpm ）
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弃上清，真空抽干，溶于 10ul双 蒸去离子水中
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取样，电泳鉴定
（二）聚丙烯酰胺/尿素胶制备：
将玻板洗净，拭干； 70% 乙醇洗，凉干；内层涂硅油，
重蒸水洗净，吹干
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混合： 20% 聚丙烯酰胺液 20ml
10 × TBE 5ml
46%尿素 25ml
总计40ml过滤纸滤过
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加 10%过硫酸胺（AP）250μl；用双蒸去离子水定容至100ml，混匀
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倒胶前加入 TEMED 50μl，混匀
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灌胶，待凝胶聚合后，将测序胶板安装于测序电泳槽中
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电泳槽中加入 800ml1 × TBE
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预电泳
