上海士锋生物科技有限公司
中级会员 | 第14年

13127537090

标准品
培养基
培养基原料 霍乱弧菌诊断血清 大肠艾希氏菌诊断血清 志贺氏菌属诊断血清 沙门氏菌属诊断血清 标准血清,诊断血清 抗生素药敏纸片 微生物配套试剂 微生物生化管 管装培养基 即用型液体培养基 一次性培养基平板 显色培养基 临床培养基 菌种保存培养基 四环素检定、厌氧亚硫酸盐还原杆菌检测培养基 维生素检测培养基 一次性卫生用品卫生检测培养基 罐头食品商业无菌检测培养基 饮用水及水源检测培养基 药品、生物制品检测培养基 化妆品检测培养基 动物细胞培养基 啤酒检验培养基 军团菌检测培养基 支原体检测培养基 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验培养基 弯曲杆菌检验培养基 产气荚膜梭菌、肉毒梭菌、厌氧菌检验培养基 阪崎肠杆菌检验培养基 溶血性链球菌检测培养基 李斯特氏菌检测培养基 弧菌检测培养基 乳酸菌、双歧杆菌检测培养基 酵母、霉菌检测培养基 检测培养基 沙门氏菌、志贺氏菌检验培养基 大肠菌群、粪大肠菌群、大肠杆菌及肠杆菌科检测培养基 细菌总数检测,增菌培养基
抗体
生物试剂
细胞
菌株
血清
细胞分离试剂
试剂盒

男女呻吟久久免费视频 哺乳动物细胞总RNA的分离

时间:2017/7/18阅读:823
分享:

一、细胞的裂解 
单层细胞的裂解 
悬浮培养的细胞或组织单细胞悬液的裂解 
a.单层细胞的裂解 
a)吸出培养液,以7ml用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液PBS冲洗细胞培养皿内的单层细胞,重复1次,将平板置于冰上直至所有单层细胞冲洗完毕。也可将平板放在一块铝板上,再将铝板置于冰盘上。 
b)直径为90mm的培养皿需加0.5ml RNA提取缓冲液, 并使之遍布整个平板的表面。 
RNA提取缓冲注液 
0.14mol/L NaCL 
1.5mmol/L MgCL2 
10mmol/L Tris.CL(pH8.6) 
0.5NP-40 

1mmol/L二硫苏糖醇(DTT 
100单位/ml胎盘rna酶抑制剂或20mmol/L氧钒核糖核苷复合物 
c)加0.5ml蛋白酶消化缓冲液,用刮棒混匀粘稠状裂解物并将其刮到平板的边缘。 
蛋白酶消化缓冲液 
0.2mol/L Tris.Cl(pH8.0) 
25mmol/L EDTA(pH8.0) 
0.3mol/L NaCl 
2 SDS 

d)用装有21号针头的皮下注射器抽吸细胞裂解物,再将其注入聚丙烯管内。重复34次,剪切DNA 
c)加蛋白酶K至终浓度为200μg/ml,充分混匀后置于37温育30分钟。 
蛋白酶K以贮存液的形式保存,贮存液为20mg/ml 蛋白K溶液。 
b.悬浮培养的细胞或组织单细胞悬液的裂解 
a)于42000g离心5分钟收集细胞,以10倍体积用冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲液悬沉淀,洗涤细胞3次,每次均用大口径的吸管轻轻吹打细胞沉淀,使其*分散。 
b)估计细胞沉淀的体积,用10-20倍体积的RNA提取缓冲液重悬之。 
c)加入与步骤b)所加RNA提取缓冲液体相同的蛋白酶消化缓冲液,用振荡器迅速混匀。用装有21号针头的皮下注射器抽吸细胞裂解物,再将其注入聚丙烯管内。重复34次,剪切DNA 
d)加蛋白酶K至终浓度为200μg/ml,充分混匀后置于37温育30分钟。蛋白酶K以贮存的形式保存,贮存液为20μg/ml蛋白酶K水溶液。 
二、提取步骤 
1)用等体积酚:仿抽提1次,以去除蛋白质。 

会员登录

×

请输入账号

请输入密码

=

请输验证码

收藏该商铺

X
该信息已收藏!
标签:
保存成功

(空格分隔,最多3个,单个标签最多10个字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我们将在第一时间回复您~
拨打电话
在线留言