如何操作Elisa试剂盒

大部分 ELISA检测 均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深。超过一周测定的需－20℃保存。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并避免产生气泡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作，也可加入适当防腐剂elisa试剂盒批发。

　　抗凝不*的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是肝素抗凝剂。

　　1.血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70℃以下。

　　2.在使用微量加样器时，吸取不同瓶子中液体后要更换枪头，即使吸取标准品溶液。

　　3.吸取液体时速度不易太快，以免产生气泡，吸取的量不够准确。

　　4.样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染，一则细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些细菌的内源性酶，如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。1．5吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸，减少误差。

　　5.液体全部加入酶标孔后，将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s，使液体充分混合均匀，也使其得到充分的反应。

　　6.孵育时要使盖板膜封好酶标板，防止水分蒸发，以防曲线不成线性。

　　7.实验前30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出，使 试剂盒 中的所有试剂与提取好的样品溶液的温度相同，酶标板只要取出所需量。

　　8.由于底物显色剂对光及其敏感，因此要避光保存。

　　要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色

　　9.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中，防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。

　　10.检测吸光度前应将酶标仪打开，将其预热30min以上。

　　11.底物为TMB，避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性，应尽量避免接触皮肤。

　　12.孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准。

　　13.要尽量做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精密度。

　　14.冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。

　　15.对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。

　　16.没有去离子水或双蒸水时，可以使用娃哈哈纯净水配制溶液，切勿使用自来水。

　　17.标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。