分子生物学常用试剂的配制

琼脂糖凝胶的配制
　　根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖*溶解，加入适量  EB 混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶*凝结后才能拔除梳子。

3 ． P1 、 P2 、 P3 的配制 P1 的配制：在  800ml 去离子水中溶入  Tris 碱 6.06g ， Na2EDTA?2H2O3.72g ，用  HCl 调整  pH 至  8.0 ，用去离子水调整容积至 1 升 ，每升 P1 内加入 RNaseA100mg 。
P2 的配制：在  950ml 去离子水中溶入  NaOH8.0g ， 20 ％ SDS 50ml ，调整容积至  1 升。
P3 的配制：在  500ml 去离子水中溶入醋酸钾 294.5g ，用冰醋酸调整  pH 值至  5.5 ，用去离子水调整容积至 1 升 。

4 ．常用缓冲液：
TE
pH 7.4
10mmol/LTris?Cl （pH7.4）
1mmol/L EDTA（pH8.0）
pH 7.6
10mmol/LTris?Cl （pH7.6）
1mmol/L EDTA（pH8.0）
pH 8.0
10mmol/LTris?Cl （pH8.0）
1mmol/L EDTA（pH8.0）
STE（ 亦称  TEN）
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl （pH8.0）
1mmol/L EDTA（pH8.0）
STET
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl （pH8.0）
1mmol/L EDTA（pH8.0）
5%Triton X-100
TNT
10mmol/LTris?Cl （pH8.0）
150mmol/L NaCl
0.05% Tween 20
电泳缓冲液
Tris- 乙酸（ TAE ）： 50× 浓贮存液（每升）： 242g  Tris 碱

5   7.1ml 冰乙酸
100ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0）
使用时再稀释 50 倍。

Tris- 磷酸（ TPE ）： 10× 浓贮存液（每升）： 108g  Tris 碱
15.5ml 85 ％磷酸（ 1.679g  /ml ）
40ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0）
使用时再稀释 10 倍。

Tris- 硼酸（ TBE ）： 5× 浓贮存液（每升）： 54g  Tris 碱
27.5g 硼酸 20ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0）
使用时再稀释 10 倍。

碱性缓冲液： 1× 使用液（每升）： 5ml10mol/L NaOH
2ml 0.5mmol/L EDTA（pH8.0）

Tris- 甘氨酸： 5× 浓贮存液（每升）： 15.1g  Tris 碱
94g 甘氨酸（电泳级）（ pH8.3 ）
50ml 10%SDS （电泳级）
2×SDS 凝胶加样缓冲液
100mmol/L Tris?HCl（pH6.8）
200mmol/L 二硫苏糖醇（ DTT ）
4%SDS （电泳级）
0.2 ％溴酚蓝
20 ％甘油

30 ％丙烯酰胺：
将 29g 丙烯酰胺和 1gN,N’ －亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 60ml 的水中，加热至 37 ℃ 溶解之，补加
水至终体积为 100ml 。用 Nalgene 滤器 （0.45 孔径 ） 过滤除菌查证该溶液的 pH 值应不大于 7.0 ，置棕色瓶中
保存于室温。

10mol/L 乙酸铵：
把 770g 乙酸铵溶解于 800ml 水中，加水定容至 1L 后过滤除菌。

1mol/LCaCl2 ：
在 200ml 纯水中（ Milli-Q 水或相当级别的水）溶解 54gCaCl2?6H2O ，用 0.22 滤器过滤除菌，分装成 10ml 小份贮存于－ 20 ℃ 。

2.5mol/LCaCl2 ：
在 20ml 蒸馏水中溶解 13.5gCaCl2?6H2O ，用 0.22 滤器过滤除菌，分装成 1ml 小份贮存于－ 20 ℃ 。

1mol/L 二硫苏糖醇（ DTT ）：
用 20ml0.01mol/L 乙酸钠溶液（ pH5.2 ）溶解 3.09gDTT ，过滤除菌后分装成 1ml 小份贮存于－ 20 ℃ 。

0.5mol/LEDTA（pH8.0） ：
在  800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠（ EDTA-Na?H2O ），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用 NaOH 调节溶液的 pH 值至 8.0 ，然后定容至 1 升 ，分装后高压灭菌备用。

溴化乙锭（ 10mg/ml ）：
在 100ml 水中加入 1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其*溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。

1mol/LMgCl2 ：
在 800ml 水中溶解 203.3gMgCl2?6H2O ，用水定容至 1 升 ，分装成小份并高压灭菌备用。

酚：氯仿：
把酚和氯仿等体积混合后用 0.1mol/LTris?Cl（pH7.6） 抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的 0.01mol/LTris?Cl（pH7.6） 液层，保存于 4 ℃ 。

磷酸缓冲盐溶液（ PBS ）：
在 800ml 蒸馏水中溶解 8g  NaCl 、 0.2g  KCl 、 1.44gNa2HPO4 和 0.24gKH2PO4 ，用 HCl 调节溶液的 pH 值至  7.4 ，加水定容至  1 升，高压蒸汽灭菌  20min 。保存于室温。

乙酸钾溶液（用于碱裂解）：
在 60ml 5mol/L 乙酸钾溶液中加入 11.5ml 冰乙酸和 28.5ml; 水，即成钾浓度为 3mol/L 而乙酸根浓度 5mol/L 的溶液。

3mol/L 乙酸钠 （pH5.2 和  7.0） ：
在 800ml 水中溶解 408.1g 三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH 值至 5.2 或用稀乙酸调节 pH 至 7.0 ，加水定容至 1 升 ，分装后高压灭菌。

1mol/LTris ：
在 800ml 水中溶解 121.1gTris 碱，加入浓 HCl 调节 pH 至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可zui后调定 pH 值，加水定容至 1 升 ，分装后高压灭菌。

Tris 缓冲盐溶液（ TBS ）：
在 800ml 蒸馏水中溶解 8gNaCl 、 0.2gKCl 和 3gTris 碱，加入 0.015 酚红并用 HCl 调 pH 值至 7.4 ，用蒸馏水定容至 1 升 ，分装后在 15lbf/in2（1.34×105Pa） 高压下蒸汽灭菌 20 分鈡，于室温保存。

5mmol/LNH4Ac 溶液：
秤取乙酸铵 192.7g ，加重蒸水 250ml 混匀，加重蒸水定容至 500ml ， 1.1kg /cm2 灭菌 20min 。

10mg/mlBSA （小牛血清白蛋白）溶液：
秤取 100mg 小牛血清白蛋白溶于 10ml 灭菌重蒸水中。置 4 ℃ 冰箱贮存备用。

10% 十二烷基硫酸钠（ SDS ）：
在 900ml 水中溶解 100g 电泳级 SDS ，加热至 68 ℃ 助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的 pH 值至 7.2 ，加入水定容至 1L ，分装备用。