人C-反应蛋白（CRP）elisa试剂盒说明书

本试剂盒 只能用于 科学 研究 ， 不得用于医学诊断 。

人 C-反应蛋白（ CRP ） 定量 检测试剂盒（ELISA ）

使用说明书

【试剂盒名称】

人 C-反应蛋白（ CRP ） 定量检测试剂盒（ELISA ）

【试剂盒 用途 】

定量检测人血清、血浆及相关液体样本中 C-反应蛋白（ CRP ） 的含量。

【检测 原理 】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA ）。将标准品、待测样本加入到预先包被人 C-反应蛋白（ CRP ） 单克隆抗体透明酶标包被板中， 温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分， 再加入酶标工作液， 温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A 、 B ，底物（ TMB ）在辣根过氧化物酶（ HRP ）催化下转化为蓝色产物， 在酸的作用下变成黄色， 颜色的深浅与样品中 人 C-反应蛋白（ CRP ） 浓度 呈正相关，450nm 波长下测定 OD 值，根据标准品和样品的 OD 值，计算样本中人 C-反应蛋白（ CRP ） 含量。

【试剂盒 组成 】

1	酶标包被板	12 孔 ×8 条	7	显色剂 A 液	6 m L
2	标准品	0.3m L × 6管	8	显色剂 B 液	6 m L
3	20 倍浓缩洗涤液	2 5 m L	9	终止液	6 m L
4	样 本 稀释液	6 m L	10	说明书	1 份
5	特殊稀释液	6mL	11	封板膜	2 张
6	酶标试剂	6m L	12	密封袋	1 个

备注： 标准品（ 1 号 → 6 号 ）浓度依次为： 2400 、 1200 、 600 、 300 、 150 、 75 μ g/L

【 需要而未提供的试剂和器材 】

1 、 37 ℃ 恒温箱

2、 标准规格酶标仪

3、 精密移液器及一次性吸头

4、 蒸馏水

5、 一次性试管

6、 吸水纸

【操作步骤】

1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡 30 分钟。

2、配液：用蒸馏水将 20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本：取足够数量的 酶标包被板，固定于框架上， 分别设置标准品孔、 待测样 本 孔 和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50 μ L；待测样本孔中先加入待测样本 10 μ L，再加* 40 μ L（即样本稀释 5 倍）；空白对照孔不加。

4、温育： 37 ℃水浴锅或恒温箱温育3 0min。

5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍 干 ，每孔加满洗涤液，静置1min ，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 4 次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液 50 μ L，空白对照孔不加。

7、温育： 37 ℃水浴锅或恒温箱温育3 0min。

8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍 干 ，每孔加满洗涤液，静置1min ，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 4 次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

9、显色：每孔先加入显色剂 A 液 50 μ L，再加入显色剂 B 液 50 μ L，平板混匀器混匀 30s （或用手 轻轻 震荡 混匀 30s）， 37 ℃避光显色15min。

10、终止： 取出酶标板，每孔加终止 液50μ L ，终止反应 （颜色由蓝色立转黄色） 。

11、测定： 以空白孔调零，在终止后15 分钟内，用 4 50 nm波长测量各孔的 吸光值 （OD 值） 。

12、计算： 根据 标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据 样 本 的 OD 值 ， 在 回归方程 上 计算出 对应的 样品 浓度 ， 也可以使用各种应用软件来计算。 zui终浓度为 实际 测定 浓度 乘以稀释倍数 。

【样本要求】

1、样本 不能含叠氮钠（NaN 3 ） ，因为 叠氮钠（NaN 3 ）是 辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。

2、 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可 将标本放于 -20 ℃保存，但应 避免反复冻融 。

3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。

【注意事项】

1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。

2、 酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。

3、 建议所有 的 标准品、样本 和空白对照 都做双份检测 ，取平均值，以减小实验误差 。

4、牢记样本已经稀释 5 倍，计算结果乘以 5 才是样本实际浓度。

5、本试剂盒定量范 围为 75-2400 μ g/L ，超过此 范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果（ 75-2400 μ g/L范围内），乘以总稀释倍数即为样本zui终浓度。

6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。

7、 为 避 免交叉污染， 标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头； 酶标 工作液、*和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔 ；不得 重复使用 封板膜 。

8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。

9、底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。

【操作程序总结】

准备试剂，样品和标准品

加入准备好的样品和标准品， 37 ℃反应3 0 分钟

洗板4次，加入酶标试剂， 37 ℃反应3 0 分钟

洗板4次，加入显色液A、B， 37 ℃显色15分钟

加入终止液

15分钟之内读 OD 值

计算

【 检测范围 】

75 μ g/ L - 2400 μ g/ L

【规格】

96人份/盒

【贮藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】

6个月

本公司为国内试剂盒供应商之一，质量保证 。

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